Презентация Жидкостная хроматография онлайн

Содержание слайда: АО «Медицинский университет Астана» кафедра фармацевтических дисциплин Тема: «Жидкостная хроматография» Подготовила: Карашутова В. 203-фарм Проверила: Арыстанова Т.А. Астана, 2016

Содержание слайда: План: Понятие ЖХ; Оборудование Высокоэффективная жидкостная хроматография; Список неподвижных фаз; Механизм разделения Нормально-фазовая хроматогрофия Обращенно-фазовая хр-я Разновидность детекторов Методика детекторов Используемые формулы в ЖХ Идентификация Количественное определение Контроль примесей Условия хроматографического анализа Источники

Содержание слайда: Жидкостная хроматография (ЖХ) Это метод хроматогрофического разделения, основанный на разности распределения веществ между двумя несмешивающимися фазами, в котором жидкость, являющаяся подвижной фазой, проходит через неподвижную фазу, находящуюся в колонке.

Содержание слайда: ЖХ основана на механизмах:

Содержание слайда: Оборудование: Оборудование состоит из насосной системы, устройства ввода проб, хроматографической колонки (допускается использование термостата для колонки), детектора и регистрирующего устройства (интегратора и самописца). Подвижная фаза, обычно подаваемая под давлением из одной или нескольких емкостей, протекает через устройство ввода пробы,колонку,а затем через детектор с заданной скоростью.

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Насосная система В ЖХ насосная система необходима для доставки подвижной фазы с постоянной скоростью потока. Перепады давления должны быть сведены к минимуму, например, путем прохождения растворителя под давлением через демпферное устройство. Система труб и соединений должны выдерживать давление, развиваемое насосной системой. Допускается использование в ЖХ насосов, оснащенных устройством для «прокачки» пузырьков захваченного воздуха. Микропроцессоры, представляющие собой контролирующую систему, подают подвижную фазу или постоянного(изократическое элюирование), или переменного(градиентное элюирование) состава в соответствии с задаваемой программой. В случае градиентного элюирования насосные системы доставляют из нескольких резервуаров растворители, смешивание которых происходит либо при низком, либо высоком давлении, создаваемом насосами.

Содержание слайда: Устройство ввода проб (инжекторы) Пробу раствора вводят в движущуюся подвижную фазу в верхнюю часть колонки или рядом с ней с помощью устройства ввода проб, работающего при высоком давлении. Используют закрепленные петли и устройство с меняющимся объемом, которые действуют вручную или автоматически. Заполнение петель в ручную снижает точность введения объема.

Содержание слайда: Колонки с внутренним диаметром менее 2мм часто относят к микроколонком. Колонки с внутренним диаметром менее 2мм часто относят к микроколонком. Температура подвижной фазы и колонки должна быть постоянной в течение анализа. Чаще всего разделение проводят при комнатной температуре, допускается нагревание колонки для повышения ее эффективности, но не более 60 градусов из-за завозможности уменьшения потенциала неподвижной фазы или изменения состава подвижной фазы.

Содержание слайда: Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ): Метод ВЭЖХ разработан в 1960-х гг. Ш.Хорватом (США) и, независимо от него, Г.Киркландом (Англия) -Это вариат ЖХ, когда по колонке с сорбентом проходит подвижная фаза под высоким давлением, в которой вещества растворяются лучше и быстрее продвигаются.

Содержание слайда: Используется для качественного и количественного анализа смесей органических веществ в следующих областях:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: По ГФ РК в качестве неподвижных фаз используют:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Механизм разделения основан на использовании в качестве

Содержание слайда: На поверхности носителя, такого, как, например, кремнезем имеются силанольные группы, которые, взаимодействуя с различными силановыми реагентами, образуют ковалентно связанные силилированные производные, покрывающие различное число активных центров на его поверхности. На поверхности носителя, такого, как, например, кремнезем имеются силанольные группы, которые, взаимодействуя с различными силановыми реагентами, образуют ковалентно связанные силилированные производные, покрывающие различное число активных центров на его поверхности.

Содержание слайда: Природа функционально привитой фазы является важным параметром, определяющим разделительные свойства хроматографической системы. Наиболее часто используют следующие функционально привитые фазы: Природа функционально привитой фазы является важным параметром, определяющим разделительные свойства хроматографической системы. Наиболее часто используют следующие функционально привитые фазы: Октил –Si-⊏CH2⊐7–CH3 C8 Октадецил -Si-⊏CH2⊐17-CH3 C18 Фенил –Si-⊏CH2⊐-C6H5 C6H5 Цианопропил –Si-⊏CH2⊐3-СN СN Аминопропил –Si-⊏CH2⊐3-NH2 NH2 Диол –Si-⊏CH2⊐3-О-CH(OH)-CH2-OH O-CH(OH)-CH2-OH

Содержание слайда:

Содержание слайда: В определенных случаях в нормально-фазовой хроматографии применяют неполярную подвижную фазу, а в качестве неподвижной фазы: В определенных случаях в нормально-фазовой хроматографии применяют неполярную подвижную фазу, а в качестве неподвижной фазы: немодифицированный кремнезем, пористый графит, полярный химически модифицированный кремнезем с такими группами как, цианопропил или диол

Содержание слайда: Частицы для большинства используемых неподвижных фаз имеют

Содержание слайда: В случае обращенных фаз дополнительным фактором являются природа неподвижной фазы и степень связывания активных центров, например, содержание углерода или эндкепирование (силилирование оставшихся силанольных групп). Наличие остаточных силанольных групп обуславливает размытость пиков, особенно основных веществ. В случае обращенных фаз дополнительным фактором являются природа неподвижной фазы и степень связывания активных центров, например, содержание углерода или эндкепирование (силилирование оставшихся силанольных групп). Наличие остаточных силанольных групп обуславливает размытость пиков, особенно основных веществ.

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: В качестве детекторов применяют спектрофотометры В качестве детекторов применяют спектрофотометры В УФ Видимой области, включающие диодный набор детекторов Допускается использование: Флуоресцентных спектрофотометров Дифференциальных рефрактометров Электрохимических детекторов Масс-спектрометров Светорассеивающих Радиоактивных и других спец. детекторов

Содержание слайда: Методика Колонку уравновешивают с подвижной фазой и скоростью потока до установления устойчивого исходного состояния при комнатной температуре или температуре, указанной в частной статье. Готовят испытуемый раствор(ы) и раствор(ы) сравнения в соответствии с описанием в частной статье. Растворы не должны содержать твердых частиц. Используя растворы сравнения, настраивают прибор и подбирают объемы вводимых проб, которые позволяют получить необходимый(адекватный) сигнал. Выполняют повторные введения для проверки сходимости сигнала и проверяют при необходимости число теоретических тарелок.

Содержание слайда: Вводят растворы и регистрируют результаты хроматографирования. Для проверки сходимости сигнала выполняют повторные введения. Определяют площади пиков анализируемых компонентов. В случае, если коэффициент симметрии, вычисленный, как описано ниже, имеет значение от 0.8 до 1,20, допускается проводить определение по высоте пиков. При использовании градиентного элюирования необходимо проводить определение поплощадям пиков. При использовании внутреннего стандарта следует удостовериться, что ни один из пиков анализируемого вещества или его примеси не маскируется пиком внутреннего стандарта. Вводят растворы и регистрируют результаты хроматографирования. Для проверки сходимости сигнала выполняют повторные введения. Определяют площади пиков анализируемых компонентов. В случае, если коэффициент симметрии, вычисленный, как описано ниже, имеет значение от 0.8 до 1,20, допускается проводить определение по высоте пиков. При использовании градиентного элюирования необходимо проводить определение поплощадям пиков. При использовании внутреннего стандарта следует удостовериться, что ни один из пиков анализируемого вещества или его примеси не маскируется пиком внутреннего стандарта.

Содержание слайда: Из полученных значений вычисляют содержание определяемого компонента или компонентов. Если указано в частной статье, процентное содержание одного или нескольких компонентов анализируемой пробы определяют посредством вычисления процентной доли площади соответствующего пика или пиков к суммарной площади всех пиков, исключая пики растворителей или добавленных реактивов(метод внутренней нормализации). В этих случаях рекомендуется использование широкодиапазонного усилителя и автоматического интегратора. Из полученных значений вычисляют содержание определяемого компонента или компонентов. Если указано в частной статье, процентное содержание одного или нескольких компонентов анализируемой пробы определяют посредством вычисления процентной доли площади соответствующего пика или пиков к суммарной площади всех пиков, исключая пики растворителей или добавленных реактивов(метод внутренней нормализации). В этих случаях рекомендуется использование широкодиапазонного усилителя и автоматического интегратора.

Содержание слайда: Коэффицент симметрии пика Где b(0.05)-ширина пика на одной двадцатой высоты пика; A-расстояние между перпендикуляром, опущенным из максимума пика, и передней границей пика на одной двадцатой высоты пика.

Содержание слайда: Коэффициент разделения (R(s))

Содержание слайда: Число теоретических тарелок (n) может быть получено из данных, полученных в изократическом режиме

Содержание слайда: Коэффициент емкости (коэф. распределения масс)

Содержание слайда:

Содержание слайда: Отношение сигнал/шум (S/H)

Содержание слайда:

Содержание слайда: Идентификацию проводят одним из способов: Сравнение времен удерживания анализируемого вещества в испытуемой пробе и растворе сравнения; Сравнение относительных времен удерживания анализируемого вещества в испытуемой пробе и растворе сравнения; Сравнение хроматограммы испытуемой пробы с хроматограммой раствора сравнения или с хроматограммой, приведенной в частной статье. (В большинстве случаев используют 1 способ. 2 способ используют при плохой воспроизводимости условий хроматографирования. 3 способ оптимален для препаратов растительного и животного происхождения)

Содержание слайда: Количественное определение Проводят методами: Абсолютной калибровки (для испытуемого р-ра и р-ра сравнения рассчитывают средние значения площадей или высот пиков анализируемого в-ва. По полученным средним значениям рассчитывают концентрацию анализируемого в-ва в испытуемом р-ре) Внутреннего стандарта (для каждой хроматограммы рассчитывают отношение площади или высоты пика анализируемого в-ва к площади или высоте пика внутреннего стандарта. Полученные отношения усредняют для испытуемого р-ра и р-ра сравнения и по найденным средним значениям определяют концентрацию анализируемого в-ва в испытуемом р-ре)

Содержание слайда: Контроль примесей Для контроля примесей используют следующие подходы: Количественное определение примеси с использованием р-ра сравнения с известной концентрацией примеси (обычно в варианте абсолютной калибровки) Способ внутренней нормализации Сравнение с разбавленным р-м основного в-ва Способ стандартных добавок

Содержание слайда: Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы». Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы». Данный тест обычно проводят с использованием р-в сравнения.

Содержание слайда: Условия хроматографического анализа Размеры хроматографической колонки и материал,из которого она изготовлена; ~тип неподвижной фазы и при необходимости ее коммерческую марку; ~размер частиц неподвижной фазы; ~при использовании предколонки теже сведения указываются для нее ~температуру колонки, ~скорость потока и состав подвижной фазы; ~в случае использования градиента-программу его изменения; ~тип детектора.

Содержание слайда: Источники: «Общая фармацевтическая химия» Т.А. Арыстанова Государственная фармакопея РК