Презентация Возможности ПЦР-анализа в диагностике пневмоний, гриппа и ОРЗ онлайн

Содержание слайда: Возможности ПЦР-анализа в диагностике пневмоний, гриппа и ОРЗ

Содержание слайда: Пневмонии Заболеваемость пневмониями в развитых странах составляет 3,6 - 16 на 1000 человек Пневмонии занимают 4 – 5-е место в структуре причин смерти после сердечно-сосудистой патологии, онкологических заболеваний, цереброваскулярной патологии и хронических обструктивных заболеваний легких Среди инфекционных болезней – 1-е место Заболеваемость в возрастной группе старше 60 лет: 20 - 44 на 1000 населения в год. Летальность от пневмоний у данной категории больных - 10 – 33% Высокая летальность от пневмонии среди новорожденных и маленьких детей и достигает 25% у детей младше 5 лет Уровень смертности детей до 1 года в нашей стране в 2 – 4 раза выше (25,1 на 1000 населения), чем в других экономически развитых странах

Содержание слайда: Смертность детей до 5 лет от пневмонии

Содержание слайда:

Содержание слайда: Причины неудач в установлении этиологии пневмоний Отсутствие микробного исследования Неправильный сбор материала Возбудитель неизвестен Предшествующее лечение антибиотиками (до взятия материала) Неопределенное клиническое значение выделенного возбудителя Использование неадекватного метода лечения

Содержание слайда: Классификации пневмоний По характеру приобретения: внебольничная пневмония (ВП) нозокомиальная (внутрибольничная) пневмония Классификация ВП, учитывающая состояние иммунологической реактивности организма пациента: - типичная ВП (у пациентов с отсутствием выраженных нарушений иммунитета) - ВП у пациентов с выраженными нарушениями иммунитета (СПИД, онкогематологические заболевания и др.)

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Пневмококковая пневмония Streptococcus pneumoniae является самым частым бактериальным возбудителем ВП Пневмококковые пневмонии регистрируются у пациентов любого возраста, чаще регистрируется среди пациентов с хроническими заболеваниями

Содержание слайда: Культуральный метод в диагностике пневмококковой пневмонии Материал для исследования: мокрота, венозная кровь, инвазивные респираторные образцы, плевральная жидкость Необходимость оценки качества доставленного образца Критерии пригодности мокроты для бактериологического исследования: ˃25 сегментоядерных лейкоцитов и не более 10 эпителиальных клеток в п/з Обнаружение грамположительных кокков (чаще - ланцетовидные диплококки) d=0,5 - 1,25 мкм, не имеющих спор и жгутиков

Содержание слайда: Культуральный метод в диагностике пневмококковой пневмонии Чаще используют питательные среды: обогащенные дефибринированной кровью животных (5 %) обогащенные дефибринированной кровью человека шоколадный агар Инкубация в атмосфере с повышенным

Содержание слайда: Иммунохроматографический тест Выявление пневмококкового клеточного полисахаридного антигена в моче Возможность использования «у постели больного» Пневмококковый экспресс-тест демонстрирует приемлемую чувствительность (50 - 80 %) и достаточно высокую специфичность (> 90 %) Возможность получения ложноположительных результатов при пневмококковом носительстве

Содержание слайда: ПЦР в диагностике пневмококковой пневмонии В качестве мишеней для амплификации используются гены, кодирующие факторы патогенности: - аутолизин (lytA) пневмококковый поверхностный антиген (psaA) пневмолизин (ply) пневмококковый поверхностный протеин А (PspA) марганец-зависимая супероксид-дисмутаза (sodA) поверхностный пенициллин-связывающий белок 2b (Pbp2b) Spn9802 и Spn9828 Данные методы пока не получили распространения в клинической практике Возможность использования мультиплексной ПЦР

Содержание слайда: Пневмония, вызванная Mycoplasma pneumoniae Периодичность эпидемий с интервалами от 3 до 7 лет Распространению инфекции способствует частота и длительность контактов среди лиц, пребывающих в закрытых и полузакрытых коллективах Только в 3 - 10 % случаев микоплазменной инфекции рентгенологически диагностируется пневмония Диагностика микоплазменной пневмонии только на основании клинических или рентгенологических данных невозможна - не имеет патогномонических черт Необходимость лабораторной этиологической диагностики

Содержание слайда: Диагностика микоплазменной пневмонии обнаружение ДНК М. pneumoniae методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) выявление антигена микоплазм в реакции прямой иммунофлуоресценции (РИФ) серологические исследования по обнаружению специфических антител класса IgM и IgG к M. pneumoniae в сыворотках крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) Культуральный метод не рекомендован

Содержание слайда: Диагностика пневмонии, вызванной Chlamydophila pneumoniae С. pneumoniae - патогенная для человека грамотрицательная бактерия с облигатным внутриклеточным типом паразитирования Вызывает пневмонии различной тяжести, длительно протекающие бронхиты, фарингиты, синуситы Пневмония, вызванная С. рneumoniae, обычно имеет благоприятное течение Микст-инфекция осложняет течение заболевания и увеличивает риск летального исхода Частота заболеваемости хламидийной пневмонией выше у детей школьного возраста Эпидемические вспышки происходят каждые 4 - 10 лет Ни один из известных в настоящее время методов диагностики хламидийной пневмонии не обеспечивает 100 %-ю надежность выявления возбудителя

Содержание слайда: Культуральный метод: Культуральный метод: Длительность и трудоемкость процесса Низкая чувствительность Доступность только специализированным лабораториям Но в случае выделения жизнеспособного возбудителя диагноз может быть поставлен с наибольшей достоверностью без необходимости применения подтверждающих тестов При персистентной инфекции возбудитель переходит в некультивируемое состояние Серологический метод: применяют для ретроспективной диагностики и ретроспективного анализа природы эпидемических вспышек Для обнаружения специфических IgM-, и IgG-антител используют метод иммуноферментного анализа (ИФА) или реакцию иммунофлюоресценции (РИФ)

Содержание слайда: ПЦР-диагностика Chlamydophila pneumoniae Наиболее специфичный и чувствительный метод выявления возбудителя Но метод не дает возможность дифференцировать острую и хроническую инфекцию Рекомендован биологический материал, полученный из нижних дыхательных путей

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Основные источники легионеллезной инфекции: Система водоснабжения; Системы генерирующие аэрозоль: 1. централизованные системы кондиционирования воздуха 2. бассейны, ванны с циркулирующей под давлением водой (типа джакузи) 3. другие (увлажнители воздуха, фонтаны; любое оборудование, распыляющее водный аэрозоль)

Содержание слайда:

Содержание слайда: Клинические формы

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Диагностика

Содержание слайда: Преимущества ПЦР-анализа Быстрота (от 5 до 8 часов) Специфичность (зависит от мишени, характеристик тест-сиcтемы и способа детекции) Большая чувствительность по сравнению с бактериологическим анализом Возможность быстрой идентификации L.pneumophila с обнаружением всех серогрупп (зависит от характеристик т/c)

Содержание слайда: Легионеллез - область применения ПЦР-анализа

Содержание слайда: Диагностика пневмоцистоза Возбудитель - Pneumocystis jiroveci Пневмоцисты тропны исключительно к легочной ткани Группами риска в отношении инфицированности Pneumocystis jiroveci являются: - дети недоношенные, ослабленные новорожденные и дети раннего возраста с гипогаммаглобулинемией, гипотрофией и рахитом больные лейкозом, онкологические больные, реципиенты органов, получающие иммунодепрессанты больные туберкулезом, цитомегалией и другими инфекциями - ВИЧ-инфицированные

Содержание слайда: Диагностика пневмоцистоза Паразитологический метод (импрегнация метенамин-серебряным нитратом по Гомори, окраска толуидиновым синим, гематоксилином и эозином, по Грамму и раствором Шиффа, методом Романовского-Гимза) Иммунологический метод (иммунофлюоресцентный метод (РИФ) для выявления цист и трофозоитов, выявление специфических антител классов IgG и IgM (ИФА)) ПЦР-диагностика

Содержание слайда:

Содержание слайда: Регистрируемые в РФ формы ОРЗ и потенциальные возбудители

Содержание слайда: Методы диагностики ОРВИ, применяемые на территории РФ

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Рекомендуется брать материал как можно раньше от момента появления симптомов, при госпитализации - в первые сутки

Содержание слайда:

Содержание слайда: Как правильно держать зонды

Содержание слайда: Мазки из носоглотки

Содержание слайда: Мазки из ротоглотки

Содержание слайда:

Содержание слайда: Этиологическая расшифровка ОРЗ методом ПЦР (Москва, ФГУН ЦНИИЭ)

Содержание слайда:

Содержание слайда: Высокоэффективна для этиологической диагностики ОРЗ спорадического и вспышечного характера Высокоэффективна для этиологической диагностики ОРЗ спорадического и вспышечного характера Использование ПЦР позволит уточнить долю типичных бактериальных возбудителей в этиологической структуре пневмоний и изучать роль вирусных агентов и вирусно-бактериальных ассоциаций в патогенезе ОРЗ Внедрение ПЦР позволит избежать часто необоснованного применения антибиотиков при ОРВИ, и своевременно назначать специфическую терапию при инфицировании бактериальными возбудителями ОРЗ Перспективы изучения этиологии хронических заболеваний дыхательных путей (бронхиальной астмы, ХОБ, ХОБЛ)

Содержание слайда: ПЦР тест-системы, производимые в ЦНИИЭ АмплиСенс®

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Характеристика основных возбудителей ОРЗ

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Бокавирус человека Открыт в 2005 году Зарегистрирована высокая распространенность (6 годам все дети имеют антитела к бокавирусу человека) Доказательcтво инфекционности: - зарегистрировано выявление ДНК возбудителя в назофарингеальных мазках и в крови с одновременным повышением титра антител > 10 раз у пациентов с ОРЗ нижних отделов респираторного тракта Вирусная ДНК обнаруживается также в фекалиях, сыворотке, моче

Содержание слайда:

Содержание слайда: Коронавирусы – возбудители ОРЗ

Содержание слайда: SARS/ТОРС: хронология событий

Содержание слайда: Циветты – источник вируса ТОРС для человека

Содержание слайда: РТ-ПЦР РНК вируса SARS-CoV (<7 дней) РТ-ПЦР РНК вируса SARS-CoV (<7 дней) Серология ИФА IgM и IgG (≥2 недели) специфичность - 95% IgM в ИФА сохраняется более 4 недель

Содержание слайда:

Содержание слайда: Вирусы гриппа - классификация

Содержание слайда: Грипп A Вызывает эпидемии и пандемии, ежегодно в мире: 600 млн случаев заболеваний, 150 - 200тыс случаев госпитализаций, 250-500тыс летальных исходов, Субтипы гриппа A отличающиеся по сочетанию двух поверхностных гликопротеинов: Гемагглютинин (HA) = 16 типов Нейраминидаза (NA) = 9 типов Все субтипы вируса А циркулируют среди диких птиц Сезонный грипп: только субтипы H1N1, H3N2 циркулируют среди людей в настоящее время

Содержание слайда:

Содержание слайда: Мутационный процесс вируса гриппа А Антигенный дрейф (Незначительные изменения HA/NA) Точечные мутации во время репликации, подтип остается тем же Следствия: Постоянные изменения антигенных свойств Ежегодные эпидемии Необходимость ежегодного обновления вакцин

Содержание слайда: Пандемии гриппа в ХХ веке и в ХХI веке….

Содержание слайда: Вирус гриппа A/H5N1 Вирус может присутствовать у инфицированной птицы во всех органах и частях Выживание в фекалиях: 35 дней при 4°C/6 дней при 37°C Выживание в птичниках: Несколько недель Только тщательная термическая обработка позволяет инактивировать вирус Замораживание/охлаждение неадекватны Яйца инфицированной птицы могут быть контаминированы как изнутри так и снаружи скорлупы (кипячение не менее 10 минут)

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Пандемия гриппа 2009г (A/H1N1)

Содержание слайда:

Содержание слайда: Динамика заболеваемости и смертности

Содержание слайда: Лабораторная диагностика: рекомендации Центра по контролю и профилактике заболеваний CDC США ПЦР с использованием валидированных протоколов Изоляция вируса в культуре MDCK или на куриных эмбрионах с последующим секвенированием генома (окончательная идентификация) Не рекомендуются быстрые тесты по обнаружению антигенов гриппа А: иммунофлуоресценция, иммунохроматография, в связи с низкой чувствительностью (от 40 до 60%) и отсутствием специфичности определения «свиного» штамма

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда:

Содержание слайда: Спасибо за внимание! Спасибо за внимание!