Оцените презентацию от 1 до 5 баллов!
Тип файла:
ppt / pptx (powerpoint)
Всего слайдов:
14 слайдов
Для класса:
1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11
Размер файла:
660.50 kB
Просмотров:
71
Скачиваний:
0
Автор:
неизвестен
Слайды и текст к этой презентации:
№1 слайд![Метод УФ-спектроскопии](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img0.jpg)
Содержание слайда: Метод УФ-спектроскопии
Лабораторная работа №8 по «Генетике микроорганизмов»
№2 слайд![План Теоретические основы](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img1.jpg)
Содержание слайда: План:
Теоретические основы метода УФ-спектроскопии
Понятия поглощения (оптической плотности), пропускания, молярной экстинкции
Обощенный закон Бугера-Ламберта-Бера
Параметры спектров поглощения веществ
Закон аддитивности
Определение чистоты препарата и концентрации ДНК спектрофотометрическим методом
№3 слайд![Теоретические основы](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img2.jpg)
Содержание слайда: Теоретические основы
Рассмотрим кювету с раствором какого-либо окрашенного вещества известной концентрации С
Толщина кюветы l
Пусть на кювету падает монохроматический световой луч интенсивности I0, а интенсивность луча, прошедшего через кювету и измеренного с помощью фотоприёмника, равна I
№4 слайд![Пропускание Отношение](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img3.jpg)
Содержание слайда: Пропускание
Отношение интенсивностей прошедшего и падающего излучений называется пропусканием и обозначается Т
Т=I/I0
Величина Т измеряется в долях единицы или в процентах.
№5 слайд![Поглощение Отношение](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img4.jpg)
Содержание слайда: Поглощение
Отношение интенсивности света, поглощённого образцом (I0-I), к интенсивности падающего на кювету I0 называется поглощением:
(I0-I)/ I0=1- I/I0=1-Т
Как видно из определения, величины пропускания Т и поглощения (1-Т) изменяются в пределах от 0 до 1 (от 0 до 100 %)
№6 слайд![Закон Бугера-Ламберта-Бера В](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img5.jpg)
Содержание слайда: Закон Бугера-Ламберта-Бера
В общем случае поглощение (1-Т) не пропорционально концентрации вещества, поэтому для определения концентрации используют другой показатель – оптическую плотность
D=lg(I/I0)
Связь между оптической плотностью и концентрацией вещества описывается законом Бугера-Ламберта-Бера:
D=εCl,
где С – концентрация вещества, моль/л,
l – толщина кюветы, см,
ε – молярный коэффициент погашения (коэффициент экстинции)
Из определения оптической плотности очевидно, что
D=lg(1/T)
Так как значения Т заключены в пределах от 1 до 0, то величина D может изменяться от 0 до 2
№7 слайд![Коэффициент молярной](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img6.jpg)
Содержание слайда: Коэффициент молярной экстинции
Так как оптическая плотность – величина безразмерная, то коэффициент молярной экстинции будет иметь размерность л/(моль·см).
Этот коэффициент и определяет поглощательную способность того или иного вида молекул и её зависимость от длины волны света, т.е. спектр поглощения ε=f(λ).
№8 слайд![Параметры спектров поглощения](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img7.jpg)
Содержание слайда: Параметры спектров поглощения
№9 слайд![Параметры спектров поглощения](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img8.jpg)
Содержание слайда: Параметры спектров поглощения
№10 слайд![Применение метода по](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img9.jpg)
Содержание слайда: Применение метода
по измеренной на спектрофотометре оптической плотности D=lg(I/I0) при известных ε и l можно определить концентрацию вещества
С=D/(εl)
Обычно оптическую плотность измеряют при длине волны, соответствующей максимуму поглощения. Наибольшая точность измерений достигается при оптической плотности 0,43. Точность измерения падает при слишком больших и при слишком маленьких поглощениях
№11 слайд![Закон аддитивности](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img10.jpg)
Содержание слайда: Закон аддитивности
№12 слайд![Измерение спектра поглощения](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img11.jpg)
Содержание слайда: Измерение спектра поглощения ДНК
Максимум поглощения ДНК λмакс приходится на длину волны около 260 нм
а ε=6600, однако, индивидуальные основания имеют λмакс (в нм):
260,5 для аденина;
264,5 для тимина;
246 для гуанина и
267,0 для цитозина
Соответственно ε оснований при λмакс 13,4×103 , 7,9×103 , 10,7×103 , 6,1×103
№13 слайд![Измерение спектров](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img12.jpg)
Содержание слайда: Измерение спектров биологических препаратов
Неравномерное распределение вещества приводит к тому, что часть света проходит мимо частиц не поглощаясь - эффект сита
увеличивает интенсивность прошедшего света I, а следовательно и светопропускание Т (D падает)
Гетерогенность биологических образцов приводит к рассеянию на границах раздела фаз «среда–частица» свет не попадает на фотоприёмник
вызывая кажущееся падение I (Т падает, а D возрастает)
В результате максимумы сглаживаются и уширяются полосы поглощения
Чтобы избежать этого, необходимо использование более тонких и гомогенных образцов, а также сред с более близкими к частицам коэффициентами преломления
№14 слайд![](/documents_6/6d2537295361f51f757ac07b638792b9/img13.jpg)