Презентация Иммунологические методы диагностики инфекционных заболеваний онлайн

Содержание слайда:

Содержание слайда: Реакции иммунитета – реакции между АГ и АТ или между АГ и сенсибилизированными лимфоцитами Реакции иммунитета – реакции между АГ и АТ или между АГ и сенсибилизированными лимфоцитами Происходят в живом организме и могут быть воспроизведены в лабораторных условиях

Содержание слайда: Особенности: Особенности: Высокочувствительны (улавливают АГ в больших количествах) Строго специфичны (позволяют отличить близкие по составу АГ) Широко используются в решении теоретических и практических вопросов медицины, биологии: в иммунологии, микробиологии, биохимии, генетике, онкологии, др.

Содержание слайда: Серологические (гуморальные) реакции – Серологические (гуморальные) реакции – р-ции АГ+АТ (АТ всегда находятся в жидкой среде, сыворотке) Serum - сыворотка Humor - жидкость Клеточные реакции - р-ции АГ с сенсибилизированными лимфоцитами

Содержание слайда: Взаимодействии АГ-АТ основано на принципе взаимного узнавания, обусловленного их комплементарностью (избирательной «прилипаемостью» молекул) Взаимодействии АГ-АТ основано на принципе взаимного узнавания, обусловленного их комплементарностью (избирательной «прилипаемостью» молекул)

Содержание слайда: Способы достижения комплементарности Способы достижения комплементарности Соответствие поверхностей выступ-углубление АГ АТ

Содержание слайда: Способы достижения комплементарности Способы достижения комплементарности Противоположными электрическими зарядами: против «+» заряда располагается «-» в результате электростатических сил Кулона

Содержание слайда: Способы достижения комплементарности Способы достижения комплементарности Комбинаций электростатической и конформационной (пространственной) комплементарности и расположением друг против друга неполярных (гидрофобных) групп АГ АТ + - + - - + - + + -

Содержание слайда: типы ИР типы ИР Агглютинации Преципитации Лизиса Опсонизации Нейтрализации Связывания комплемента Соответственно каждому из феноменов in vitro АТ именуют: агглютинины, преципитины, лизины, опсонины, комплементсвязывающие (типы АТ одни и те же)

Содержание слайда: Серологические реакции в зависимости от участвующих в них компонентов и условий среды Серологические реакции в зависимости от участвующих в них компонентов и условий среды

Содержание слайда: Феномен взаимодействия: Феномен взаимодействия: Молекулы АГ, участвующих в РА и РП – поливалентны АТ – двухвалентны или пятивалентны

Содержание слайда: Возникновение в серологических р-ях крупных агрегатов, видимых невооруженным глазом, объясняется т. сети (т. образования сетевых структур) Возникновение в серологических р-ях крупных агрегатов, видимых невооруженным глазом, объясняется т. сети (т. образования сетевых структур)

Содержание слайда: Серологические р-ции – р-ции взаимодействия м/у АГ и АТ: Серологические р-ции – р-ции взаимодействия м/у АГ и АТ: 1-я фаза – специфическая – адсорбция АТ на частицах АГ

Содержание слайда: 2-я фаза – неспецифическая – комплекс АГ+АТ взаимодействует с неспецифическими факторами среды, в которой идет р-ция, и, в следствии снижения электрических зарядов, изменения физико-химических свойств АГ – результат взаимодействия виден невооруженным взглядом (склеивание, растворение…) 2-я фаза – неспецифическая – комплекс АГ+АТ взаимодействует с неспецифическими факторами среды, в которой идет р-ция, и, в следствии снижения электрических зарядов, изменения физико-химических свойств АГ – результат взаимодействия виден невооруженным взглядом (склеивание, растворение…)

Содержание слайда:

Содержание слайда: Применение серологических р-ий Применение серологических р-ий Для серодиагностики (выявление АТ в сыворотке б-ого) Для серотипирования (идентификации) – определение вида или типа АГ, выделенного из патогенного материала МКО Для определения активности (титра) сыв-ки В научных исследованиях

Содержание слайда: Применение серологических реакций Применение серологических реакций

Содержание слайда: Приготовление иммунной (диагностической) сыворотки: Получают из крови людей или животных, иммунизированных по схеме соответствующим АГ (вакциной) Определяют титр (наибольшее разведение с-ки, в котором она реагирует с соответствующим АГ в определенных условиях опыта)

Содержание слайда: иммунные сыв-ки Нативные (неадсорбированные) адсорбированные

Содержание слайда: Недостаток нативных сыв-к: Наличие в них групповых АТ (АТ к МКО, имеющим общие АГ) такие АГ есть у МКО, принадлежащих к одной группе, роду, семейству

Содержание слайда: Адсорбированные сыв-ки – строго специфичны (реагируют только с гомологичным АГ) АТ к другим (гетерогенным) АГ удалены адсорбцией Однако, даже максимально очищенные, они содержат АТ к различным антигенным детерминантам комплексного антигена, т.е. гетерогенны Гетерогенность антител снижает чувствительность методов индикации антигенов и биологический эффект иммунных сывороток

Содержание слайда: Гибридомы – клетки, вырабатывающие in vitro моноклональные АТ (каждая популяция АТ синтезируется одним клоном, т.е. отдельной линией клеток) Гибридомы – клетки, вырабатывающие in vitro моноклональные АТ (каждая популяция АТ синтезируется одним клоном, т.е. отдельной линией клеток) Гибридомы получены путем гибридизации нормальных лимфоцитов иммунизированных мышей с миеломными клетками мышей

Содержание слайда: Моноклональные АТ синтезированы к одному классу, подклассу, аллотипу, имеют один вид легких цепей, однозначную аффинность (можно получить АТ к определенному участку молекулы) Применяют для определения в сыворотке крови антигенов опухолей, микробных вирусных антигенов, для определения гормонов, медиаторов

Содержание слайда: Реакция агглютинации (РА) – склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием АТ в присутствии электролита (изотонического р-ра NaCl) Реакция агглютинации (РА) – склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием АТ в присутствии электролита (изотонического р-ра NaCl) Для р-ции необходимы: АТ (агглютинины) – в сыв-ке б-ого или в иммунной сыв-ке АГ (агглютиноген)- взвесь живых или убитых МКО, Er, др. кл-к Изотонический р-р РА применяется для серодиагностики ( при брюшном тифе, паратифах - р-я Видаля, бруцеллезе – р. Райта и др.) АТ при этом определяются в сыворотке б-го, АГ является взвесь известного убитого микроба – диагностикум идентификации микробов – АГ служит их взвесь, а антителом – известная иммунная сыворотка (диагностическая)

Содержание слайда: Постановка реакции: Постановка реакции: РА на стекле (ориентировочная) РА развернутая (в пробирках)

Содержание слайда: РА на стекле

Содержание слайда: РА развернутая РА развернутая

Содержание слайда: РА развернутая РА развернутая

Содержание слайда: Агглютинация: Мелкозернистая (О-агглютинация – при работе с АТ к О-соматическому АГ) Хлопьевидная (Н-агглютинация) наступает быстрее, образующийся при этом осадок очень рыхлый, легко разбивается

Содержание слайда: Титр сыворотки б-го сравнивают с диагностическим («законодательным») титром Если равен или выше – заболевание, ниже – начало заболевания, реконвалесценция или дальнейшая интерпретация результатов При серотипировании титр должен быть не менее половины титра диагностической сыворотки

Содержание слайда: Реакция коагглютинации - для определения антигенов с помощью антител, адсорбированных на белке А клеток стафилококка (антительный диагностикум) Реакция коагглютинации - для определения антигенов с помощью антител, адсорбированных на белке А клеток стафилококка (антительный диагностикум) Антительный диагностикум Белок А имеет сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, поэтому такие бактерии, обработанные иммунной диагностической сывороткой неспецифически адсорбируют антитела сыворотки, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба

Содержание слайда: Реакция гемагглютинации (по механизму действия): Реакция гемагглютинации (по механизму действия): РГА – серологическая (Er агглютинируются с АТ (гемагглютининами) РГА – несерологическая, в основе – биологический механизм (наличие на Er некоторых видов рецепторов к вирусным частицам) Позволяет судить о наличии вируса в материале

Содержание слайда: Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА, РПГА) Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА, РПГА) Er, с адсорбированным на поверхности растворимым АГ, приобретают способность агглютинироваться при взаимодействии с АТ к адсорбированному АГ

Содержание слайда: Реакция преципитации (РП) – выпадение в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого АГ (лизат, экстракт, гаптен) и специфического АТ в присутствии электролитов Реакция преципитации (РП) – выпадение в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого АГ (лизат, экстракт, гаптен) и специфического АТ в присутствии электролитов

Содержание слайда: Основные методы постановки РП: Основные методы постановки РП: Р. кольцепреципитации РП в агаре (геле): - радиальная иммунодиффузия (по Манчини) - двойная (встречная) радиальная иммунодиффузия (по Оухтерлони): У многокомпонентных систем между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных АГ линии преципитата сливаются; у неидентичных АГ - пересекаются

Содержание слайда: радиальная иммунодиффузия (по Манчини) : радиальная иммунодиффузия (по Манчини) : АГ, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др.

Содержание слайда: Экспресс-диагностика сифилиса (ЭДС). Экспресс-диагностика сифилиса (ЭДС).

Содержание слайда: Иммуноэлектрофорез - сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации: Иммуноэлектрофорез - сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации: смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза (в течение 1-2 часов. Различные антигены с разной скоростью перемещаются между катодом и анодом), затем в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации

Содержание слайда: Реакции лизиса (иммунный цитолиз) – растворение клеток под воздействием АТ при участии комплемента. Для реакции необходимы МО, лизины (АТ), Er или др. клетки и С′ Реакции лизиса (иммунный цитолиз) – растворение клеток под воздействием АТ при участии комплемента. Для реакции необходимы МО, лизины (АТ), Er или др. клетки и С′ Р.бактериолиза (С′ лизирует бактерии в присутствии гомологичной сыворотки) РСК – р. связывания комплемента (комплекс АГ+АТ всегда адсорбирует на себе С′)

Содержание слайда: РСК применяют РСК применяют для идентификации АГ в серодиагностике (напр. р. Вассермана) участвуют: С′ две системы АГ+АТ: основная и гемолитическая или индикаторная

Содержание слайда: Отсутствие гемолиза регистрируют как «+» результат РСК Отсутствие гемолиза регистрируют как «+» результат РСК

Содержание слайда: Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса) - метод экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса) - метод экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета

Содержание слайда: Непрямой метод РИФ - выявление комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом: Непрямой метод РИФ - выявление комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом: мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе

Содержание слайда: РИФ (ПИФ) РНИФ (НИФ) РИФ (ПИФ) РНИФ (НИФ)

Содержание слайда: Радиоиммунный метод (РИА) - основан на реакции антиген - антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (123I, 14C, 3Н, 51Сr и др.) Радиоиммунный метод (РИА) - основан на реакции антиген - антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (123I, 14C, 3Н, 51Сr и др.)

Содержание слайда: После взаимодействия АГ с АТ отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение) После взаимодействия АГ с АТ отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение) Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул АГ и АТ твердофазный РИА – меченные АГ или АТ, сорбированные в лунках полистироловых панелей

Содержание слайда: Иммуноферментный анализ (ИФА) - выявление АГ с помощью соответствующего АТ, конъюгированного с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазной и или щелочной фосфатазой) Иммуноферментный анализ (ИФА) - выявление АГ с помощью соответствующего АТ, конъюгированного с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазной и или щелочной фосфатазой)

Содержание слайда: ИФА ИФА После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции - интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител

Содержание слайда: Твердофазный ИФА - вариант теста, когда один из компонентов иммунной -реакции (антиген или антитело ) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена Твердофазный ИФА - вариант теста, когда один из компонентов иммунной -реакции (антиген или антитело ) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена

Содержание слайда: Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген(1) и меченый ферментом антиген(2) конкурируют друг с другом за антитела (3), сорбированные на твердой фазе Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген(1) и меченый ферментом антиген(2) конкурируют друг с другом за антитела (3), сорбированные на твердой фазе Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

Содержание слайда: Иммуноблоттинг (син. вестернблоттинг) - высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА Иммуноблоттинг (син. вестернблоттинг) - высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле переносят их (блоттинг - от англ, blot, пятно) из геля на активированную бумагу (1) или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с "блотами" антигенов На эти полоски наносят сыворотку больного (2) после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом (3) на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата (4), изменяющего окраску под действием фермента

Содержание слайда: Метод переноса пятен ДНК первоначально разработал Сазен (Southern) - фамилия означает ЮЖНЫЙ; метод получил название сазенблоттинг (южный перенос) Метод переноса фрагментов ДНК называют нозенблоттинг (северный перенос) переноса фрагментов белка - вестернблоттинг (западный перенос)

Содержание слайда: Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ)- электронная микроскопия микробов, чаще вирусов, обработанных соответствующими антителами Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ)- электронная микроскопия микробов, чаще вирусов, обработанных соответствующими антителами Вирусы, обработанные иммунной сывороткой, образуют иммунные агрегаты (микропреципитаты). Вокруг вирионов образуется "венчи" из антител, контрастированный фосфорно-вольфрамовой кислотой или другими электроннооптически плотными препаратами

Содержание слайда: Реакция иммунного прилипания (РИП) основана на активации системы комплемента корпускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой Реакция иммунного прилипания (РИП) основана на активации системы комплемента корпускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой В результате образуется активированный третий компонент комплемента (СЗb), который присоединяется к корпускулярному антигену в составе иммунного комплекса На эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах имеются рецепторы для СЗb, благодаря чему при смешивании этих клеток с иммунными комплексами, несущими СЗb, происходят их соединение и агглютинация

Содержание слайда: АТ иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т.е. их нейтрализацией АТ иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т.е. их нейтрализацией Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген - антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы)

Содержание слайда: При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген - антитело. При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген - антитело. Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток: А - цитопатогенный эффект (ЦПЭ) в результате размножения вирусов; Б - ЦПЭ отсутствует в результате нейтрализации вирусов антителами

Содержание слайда: Реакция флоккуляции (по Рамону) ( лат . f1оecus - хлопья шерсти) - появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке при реакции токсин - антитоксин или анатоксин – антитоксин Реакция флоккуляции (по Рамону) ( лат . f1оecus - хлопья шерсти) - появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке при реакции токсин - антитоксин или анатоксин – антитоксин для определения активности антитоксической сыворотки или анатоксина

Содержание слайда: