Презентация Физико-химические свойства белков. Электрофоретические и хроматографические методы онлайн

Содержание слайда: Физико-химические свойства белков. Электрофоретические и хроматографические методы Анна Дидио Кафедра биохимии 2016

Содержание слайда: Хроматография История открытия Хроматография - метод разделения и анализа смесей веществ, а также изучения физико-химических свойств веществ. Основан на распределении веществ между двумя фазами — неподвижной (твердая фаза или жидкость, связанная на инертном носителе) и подвижной (газовая или жидкая фаза, элюент). Название метода связано с первыми экспериментами по хроматографии, в ходе которых разработчик метода Михаил Цвет разделял ярко окрашенные растительные пигменты.

Содержание слайда: Хроматография История открытия 1872 Асти (Италия) – 1919 Воронеж (Россия) 1893 — бакалавр физических и естественных наук (Женевский университет) 1896 — возвращение в Россию 1901 — защита магистерской диссертации в Казанском университете 1910 — защита диссертации в Варшавском университете «Хромофиллы в растительном и животном мире»

Содержание слайда: Хроматография История открытия Работал в Санкт-Петербурге, Варшавском университете, Москве, Нижнем Новгороде, Воронеже 1918 — январь — выдвижение на Нобелевскую премию (отказ) 1919 — умер от голода (по другим сведениям, от болезни), похоронен в Воронеже на территории монастыря.

Содержание слайда: Первая хроматография проведена в 1900 году. Первая хроматография проведена в 1900 году. М.Цвет использовал колонку, заполненную карбонатом кальция, для разделения пигментов растительного происхождения. Первое сообщение о разработке метода хроматографии было сделано Цветом в 1901 году на XI Съезде естествоиспытателей и врачей в С.-Петербурге. В 1910—1930 годы метод был забыт и не развивался. В 1941 году А. Дж. П. Мартин и Р. Л. М. Синг разработали новую разновидность хроматографии, в основу которой легло различие в коэффициентах распределения разделяемых веществ между двумя несмешивающимися жидкостями. Метод получил название «распределительная хроматография». Нобелевская премия 1952 года.

Содержание слайда: Хроматография Общие понятия Хроматография — метод разделения смесей веществ или частиц, основанный на различиях в скоростях их перемещения в системе несмешивающихся и движущихся относительно друг друга фаз. Подвижная фаза (элюент): газ, жидкость или (реже) сверхкритический флюид. Неподвижная фаза — твердая фаза или жидкость, связанная на инертном носителе, в адсорбционной хроматографии — сорбент. Колонка — содержит хроматографический сорбент, в ней происходит разделения смеси на индивидуальные компоненты. Хроматограмма – регистрируемый на детекторе результат зависимости концентрации компонентов на выходе из колонки от времени.

Содержание слайда: Хроматографический процесс – многочисленные циклы сорбции–десорбции Хроматографический процесс – многочисленные циклы сорбции–десорбции

Содержание слайда: Хроматография для анализа аминокислот

Содержание слайда: Хроматография для анализа белков Ионообменная Эксклюзионная Афинная

Содержание слайда: Хроматография для анализа белков

Содержание слайда: Vt = общий объём колонки Vt = общий объём колонки Vo = объём подвижной фазы снаружи от частиц сефадекса Ve = объем, необходимый для элюции компонента Коэффициент разделения, Kd = (Ve – Vo)/Vt Kav = (Ve – Vo)/(Vt-Vo) Kav зависит от гидродинамического радиуса молекулы, который пропорционален молекулярному весу и форме молекулы.

Содержание слайда: Хроматография для анализа белков

Содержание слайда:

Содержание слайда: Хроматография: детекция и работа с хроматограммой Способы детекции: Спектрофотометрические Визуальная оценка Масс-спектрометрия

Содержание слайда: Разрешение хроматограмы

Содержание слайда: Диализ как метод очистки от низкомолекулярных примесей

Содержание слайда: Диализ как метод очистки от низкомолекулярных примесей Диализ - очистка коллоидных растворов и субстанций высокомолекулярных веществ от растворённых в них низкомолекулярных соединений при помощи полупроницаемой мембраны. При диализе молекулы растворенного низкомолекулярного вещества проходят через мембрану, а неспособные проходить через мембрану частицы остаются за ней. Процесс диализа основан на процессах осмоса и диффузии

Содержание слайда: Диск-электрофорез ПААГ в присутствии с ДДС-Na.

Содержание слайда: Общие принципы электрофореза Полимеризация геля

Содержание слайда: Общие принципы электрофореза